一、什么是动脉粥样硬化

动脉粥样硬化（Atherosclerosis,AS) 是一种炎症性、多阶段的退行性的复合性病变，病理变化十分复杂，至今没有得到完全的阐明。20世纪90年代美国科学家Ross提出动脉粥样硬化发病的损伤学说，即动脉粥样硬化是在损伤因子的作用下导致的4个慢性炎症的过程，主要包括四期的病理变化：动脉血管内膜功能紊乱期、血管内膜脂质条纹期、典型斑块期和斑块破裂期。动脉粥样硬化的病程是从受累动脉的内膜受损开始，先后出现局部脂质条纹、平滑肌细胞的迁移增生、纤维分泌，直至在动脉内膜形成以脂质为核心，外有纤维帽包裹的典型斑块。由于动脉内膜聚集的脂质斑块外观呈黄色粥样，故称为动脉粥样硬化。形成的斑块有稳定性斑块和易损性（不稳定）斑块两种类型。

 

二、引起动脉粥样硬化的主要原因

动脉粥样硬化的病因尚不完全清楚，但高脂血症或高脂蛋白血症与动脉粥样硬化发生密切相关。目前认为除了遗传、年龄、肥胖、吸烟、机体内氧化应激水平升高和缺乏体力活动等危险因素外，人类所吃的食物在动脉粥样硬化的发病中起着极为重要的作用， 尤其是高能量和高脂肪的食物。

 

三、动脉粥样硬化对健康的主要危害

冠状动脉粥样硬化性心脏病是动脉粥样硬化导致器官病变的最常见疾病也是严重危害人类健康的常见病。过去认为动脉粥样硬化性心脏病严重时可导致心肌梗死和心力衰竭，但是近年来的研究认为易损性斑块的破裂还是导致脉管综合症以及死亡的主要原因。动脉沉积斑表面有一层称作“盖子”的细胞（纤维帽）将沉积斑的核与流经沉积斑的血流分隔开。在易损性斑块中（比较危险的沉积斑），表面的这层“盖子”细胞既薄且脆。在血流的冲击下，盖层很容易破碎。粥样沉积斑一旦破碎，破碎的碎片会混入血液。血流开始在沉积斑破碎的部位凝集，这种凝集发生的速度非常快，能迅速地堵塞整个动脉血管。当动脉血管在短时间被堵塞时，血流没有时间形成其他路径。这种情况发生后，破裂处下游的血流量急剧减少，心肌不能得到足够的氧气，这时心肌细胞开始死亡，心脏的搏动机能开始哀退，患者会感到胸部剧痛，或先是肩臂部有灼痛感，然后向上传导至脖子和下巴处。简单说，患者开始进入死亡状态。

现在知道了动脉粥样硬化是如何导致心脏病的，动脉斑的破裂是最致命的。那么人类怎么才能预测心脏病发作的时间呢？不幸的是，按照人类现有的技术条件，还做不到预测心脏病的发作时间，不知道什么时候沉积斑会破裂．哪些沉积斑会破裂，或情况可能有多严重。但是事实证明了心脏病发作的相对危险度。因而预防斑块的形成、促进斑块的消退和提高斑块的稳定性处动脉粥样硬化防治的主要策略，也是预防冠状动脉粥样硬化性心脏病的主要途径。

 

四、普洱茶抗动脉粥样硬化作用的研究

人类高脂血症与动脉粥样硬化发病密切相关。降低血浆的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，升高血浆高密度脂蛋白胆固醇(HD—C)的措施显示不能够降低冠心病的发生率和死亡率。目前临床治疗动脉粥样硬化主要措施就是改善血脂。膳食和营养因素与血脂的变化密切相关控制饮食和改善营养状况已成为防治动脉粥样硬化和冠心病的重要途径。

本书第一章介绍过，高脂血症可以分成原发性与继发性两类，即原发性高脂血症和继发性高脂血症。遗传因素引起的高脂血症属原发性高脂血症，可能发生在细胞水平上，主要表现为细胞表面脂蛋白受体缺陷以及细胞内某些酶的缺陷（如脂蛋白脂酶的缺陷或缺乏），也可能发生在脂蛋白或载脂蛋白的分子上，多由千基因缺陷引起。最常见或最明确的脂蛋白代谢异常疾病，如家族性异常B脂蛋白血症发病率为l/10000, 是由于ApoE的特殊突变导致氓及VLDL的代谢残余物与脂蛋白受体正常连接受阻。本试验则是以普洱茶作为供试材料，采用ApoE基因敲除小鼠为试验动物模型[apolipoprote in E gene Knockout,ApoE (-/-)],这种基因敲除小鼠是目前国际上公认的试验模型动物。这种小鼠血浆胆固醇浓度为正常小鼠的5倍。即使在普通饲料喂养条件下，也可以形成动脉粥样硬化几乎所有阶段的病变，并与人类的病变非常相似。期望通过这个试验，探讨普洱茶抗ApoE基因敲除小鼠高脂血症和动脉粥样硬化的作用，以期为普洱茶防治遗传因素相关的人类高脂血症和动脉粥样硬化提供试验依据。

方法

ApoE(-/-)小鼠8周龄雄性40只［实验动物生产许可证号：SCXK(京）2006-0008],购自北京大学实验动物中心。8周龄雄性（57Bl/6J小队10只［实验动物生产许可证号：SCXK（渝）2007-0008]，购自第三军医大学大坪保院。在SPF级动物实验室用全价颗粒饲料饲养［饲料生产许可证SCXK(滇）2005-2009]。适应性饲养7天后，随机分为ApoE(-/-) 对照组以及ApoE(-/-)普洱生、熟茶组和市售品药物对照组并设ApoE (+/+)对照组。对照组给予蒸饿水，干预组给予普洱生茶、熟茶30mg/(kg?hw),市售降脂中药lOmg/(kg?bw),每天经口灌胃，连续3个月。

试验期间每天观察动物外观特征、行为活动、皮毛、呼吸、五官、外生殖器及党便性状等。每周测体重一次，根据体重变化调整普洱茶给予量。3个月后，所有动物禁食不禁水过夜，次日牺牲动物，收集全血2-3ml于15ml离心管中,以3000r/min 离心15min, 制备血清，-20摄氏度冻存。检测小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇（IIDL-C >和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C)。计算动脉硬化指数（AI），检测hs-CRP: 解剖取主动脉等进行病理组织检查。

试验研究结果

1、普洱茶可明显降低由遗传因素引起的动脉粥样硬化试验动物的体重ApoE(-/-)对照和各干预组体重、肝脏重量均大于ApoE(+/+) 对照组，说明本研究的试验小鼠已经开始出现病变。与ApoE(-/-)对照组相比，灌胃普洱茶8周后ApoE成(-/-)普洱生茶组体重显著减轻，12周后普洱生茶组、普洱熟茶组和市售品药物组体重，肝脏重量均有减轻，但肝脏系数未见差异：普洱生茶组体重显著低于熟茶组（图2-1, 图2-2）。

2、普洱茶可有效调节由遗传因素引起的动脉粥样硬化试验动物的血脂水平。

ApoE(-/-)对照组和各干预组总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)以及高密度脂蛋门胆固醇(HDL-C)均高于ApoE(+/+) 对照组。与ApoE(-/-)对照组相比，普洱熟茶组和市售品药物组组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均显著降低（图2-3)，说明普洱生茶和普洱熟茶均可有效降低由遗传性因素引起的动脉粥样硬化试验动物的血脂水平。

3.、普洱茶可显著降低由遗传因素引起的动脉粥样硬化试验小鼠的动脉硬化指数(Al)

ApoE(-/-) 对照组和各干预组动脉硬化指数(AI)大于ApoE (+/+)对照组。与ApoE(-/-)对照组相比普洱生茶组、普洱熟茶组和市售品药物组动脉硬化指数(AI) 均显著降低（图2-4),提示普洱茶可显著降低由遗传性因素引起的动脉粥样硬化试验小鼠的动脉硬化指数(AT)，能够有效阻止动脉粥样硬化的发生和发展。

4. 普洱茶可显著降低由遗传因素引起的动脉粥样硬化试验小鼠心血管疾病的发生风险

C-反应蛋白（hs-CRP)是由人体中的肝细胞所产生的特殊蛋白，为发炎反应的指标。近年的研究发现，在动脉粥样硬化的形成过桯中，发炎反应扮演着重要角色。发炎指标也是评估心血管疾病风险的重要因子，而hs-CRP是目前应用最普遍的，它可以作为心血管疾病风险的预测指标。高浓度的hs-CRP 会影响血管内皮细胞的特性，造成组织的损伤。从动脉粥样硬化一开始的脂肪纹到发炎细胞的浸润及内皮细胞功能的破坏，甚至到最后硬化斑的破裂等，hs-CRP都参与其中。

本研究发现ApoE(-/-) 对照组和各干预组血清hs-CRP高于ApoE(+/+)对照组，说明试验小鼠已出现了动脉粥样硬化的病变。采用普洱生茶和熟茶灌胃3个月后，与ApoE(-/-) 对照组相比，普洱生茶组、普洱熟茶组和市售品组（药物组）试验小鼠血清hs-CRP均显著降低图（2-5),说明普洱茶可显著降低试验小鼠血清中的hs-CRP含量。

5.、普洱茶可明显减少由遗传因素引起的动脉粥样硬化试验小鼠粥样斑块的形成

本研究对试验小鼠的主动脉进行了病理检测，结果发现ApoE(+/+)对照组主动脉壁厚薄均匀，内膜、中膜和外膜未见异常（图2-6,A)：ApoE(-/-)对照组可见大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病变，内膜完整性破坏，大量泡沫细胞形成和堆积，突向管腔（图2-6,B)；普洱生茶组和普洱熟茶组动脉粥样硬化程度与ApoE(-/-)对照组相比明显减轻，内膜轻度隆起和增厚，泡沫细胞减少（图2-6,C和D)。

为了得到更准确的试验结果，本研究还对试验小鼠的主动脉病理切片进行屯镜观察，结果发现ApoE(+/+)对照组主动脉内皮细胞胞浆内吞饮小泡正常（图2-7,A)；ApoE(-/-)对照组主动脉内皮细胞水肿变性，体积增大，胞质疏松，内皮细胞坏死脱落，细胞间隙增宽，完整性破坏，胞浆内可见大量吞饮小泡（图2-7,B)；普洱生茶组与普洱熟茶组内皮细胞排列较为规则，病变程度较轻（图2-7,C和D)，说明普洱茶在预防动物动脉粥样硬化方面起到了一定作用。

五、普洱茶防治动脉粥样硬化的优势分析

以往的大小鼠等动脉粥样硬化(AS)动物模型多采用高脂饲料长期饲养，由于大小鼠等动物先天具有抵抗胆固醇的特性，在制作模型时胆固醇负荷往往是数十倍于正常膳食的急性过程，这与人类实际的慢性高脂血症情况相差甚远。ApoE基因敲除小鼠ApoE (-/-)亦称ApoE基因缺陷小鼠，其血浆含胆固醇丰富的残粒清除受阻，喂饲普通饲料即可出现高胆固醇血症，并自发地形成纤维斑块和复合斑块，且斑块的分布与人类动脉粥样硬化斑块的分布极为相似。ApoE(-/-)小鼠在5-6周龄时主要是单核细胞趋附于损伤的内皮细胞处， 8-10周龄脂质条纹逐渐形成，15-20周龄后逐渐出现纤维斑块，粥样斑块大约在25-30周龄左右逐渐形成，35周龄以后，粥样斑块有出血、斑块破溃、血栓形成等各种并发症，甚至有的小鼠因急性心脑血管事件自发死亡。病变部位以主动脉根最为明显，其次为胸主动脉。ApoE(-/-)小鼠体内存在着严重的脂质代谢紊乱，人动脉粥样硬化各阶段的病理表现均可见于模型中。因此，目前它已成为研究动脉粥样硬化发生、发展的细胞与分子机制和研究治疗手段的极佳实验动物模型。

 

本试验采用ApoE基因敲除小鼠ApoE(-/-),检测了普洱茶干预前后血脂（TC、TG、LDL-C)和hs-CRP水平、AI值变化、主动脉病理变化结果发现与ApoE(-/-)对照组相比,普洱生茶和普洱熟茶组TC、TG、LDL-C和hs-CRP水平以及AI值明显降低，差异有统计学意义（p<0.05)。提示普洱茶有降低血脂中TC、TG和LDL-C的作用，降低体内的炎症介质水平，减轻主动脉粥样硬化损伤程度及AI值，得出普洱茶具有抗ApoE基因敲除小鼠ApoE(-/-)动脉粥样硬化作用的结论。完成了从遗传因素到饮食因素普洱茶原发性高脂血症的作用研究。一般来说，高脂饮食性高脂血症可以通过控制高脂、高胆固醇等的摄入，加强运动来调节，但遗传因素引起的往往较难控制。为什么普洱茶既对高脂饮食大鼠模型，又对ApoE基因敲除小鼠模型有作用呢？还需要进一步的探讨。